Monkeypox Virus Realtime PCR-kit
Productdetails
Beoogd gebruik
Het wordt gebruikt voor de detectie van het apenpokkenvirus in monsters van menselijk serum of laesie-exsudaat met behulp van real-time PCR-systemen.
Testprincipe
Dit product is een op fluorescente probes gebaseerd Taqman® real-time PCR-testsysteem.Specifieke primers en probes zijn ontworpen voor de detectie van het F3L-gen van het apenpokkenvirus.Interne controle gericht op het menselijk geconserveerde gen bewaakt de monsterverzameling, de monsterbehandeling en het realtime PCR-proces om vals-negatieve resultaten te voorkomen.De kit is een volledig voorgemengd gelyofiliseerd systeem, dat de materialen bevat die nodig zijn voor de detectie van het apenpokkenvirus: nucleïnezuuramplificatie-enzym, UDG-enzym, reactiebuffer, specifieke primer en probe.
Belangrijkste inhoud
De geleverde componenten staan vermeld in de tabel.
| Componenten | Pakket | Ingrediënt |
| Monkeypox-virusGevriesdroogde premix | 8 strip PCR-buisjes× 6 zakjes | Primers, probes, dNTP/dUTP-mix, Mg2+, Taq DNA-polymerase, UDG-enzym |
| MPV positieve controle | 400 μl×1 buis | DNA-sequenties die het doelgen bevatten |
| MPV negatieve controle | 400 μl×1 buis | DNA-sequenties die een menselijk gensegment bevatten |
| Oplossende oplossing | 1 ml×1 buis | Stabilisator |
| Certificaat van overeenstemming | 1 stuk | / |
Operatiestroom
1. VoorbeeldVerzameling:Het monster moet overeenkomstig de voorschriften in steriele buisjes worden verzameld
met standaard technische specificaties.
2. Reagensvoorbereiding (Reagensvoorbereidingsgebied)
Haal de componenten uit de kit eruit en breng ze op kamertemperatuur voor gebruik in stand-by.
3. Monsterverwerking (monsterverwerkingsgebied)
3.1 Nucleïnezuurextractie
Het wordt aanbevolen om vloeistofmonsters van 200 μl, positieve controle en negatieve controle voor nucleïnezuurextractie te nemen, volgens de overeenkomstige vereisten en procedures van virale DNA-extractiekits.
3.2 Oplossen van gevriesdroogd poeder en toevoeging van template
Bereid het Monkeypox Virus gelyofiliseerde premix volgens het aantal monsters.Voor één monster is één PCR-buisje met gelyofiliseerd premixpoeder nodig.Negatieve controle en positieve controle moeten als twee monsters worden behandeld.
(1) Voeg 15 μl oplossingsoplossing toe aan elke PCR-buis met het gevriesdroogde voormengsel en voeg vervolgens respectievelijk 5 μl geëxtraheerde monsters/negatieve controle/positieve controle toe aan elke PCR-buis.
(2) Dek de PCR-buisjes goed af, schud de PCR-buisjes met de hand totdat het gelyofiliseerde poeder volledig is opgelost en gemengd, verzamel de vloeistof naar de bodem van de PCR-buisjes door onmiddellijke centrifugatie op lage snelheid.
(3) Als u een gemeenschappelijk realtime PCR-instrument gebruikt voor detectie, breng dan de PCR-buizen rechtstreeks over naar het amplificatiegebied;Als u BTK-8 gebruikt voor detectie, moet u de volgende handelingen uitvoeren: breng 10 μl vloeistof over van de PCR-buis naar de reactiechipwell van BTK-8.Eén PCR-buisje komt overeen met één putje op de chip.Zorg er tijdens het pipetteren voor dat de pipet 90 graden verticaal staat.De pipetpunten met aërosolbarrière moeten met matige kracht in het midden van de put worden geplaatst en stoppen met het duwen van de pipet wanneer deze de eerste versnelling bereikt (om luchtbellen te voorkomen).Nadat de putjes zijn gevuld, verwijdert u een reactiechipmembraan om alle putjes te bedekken en wordt de chip vervolgens overgebracht naar het amplificatiedetectiegebied.
4. PCR-amplificatie (detectiegebied)
4.1 Plaats de PCR-buisjes/reactiechip in de reactietank en stel de namen van elke reactie in de overeenkomstige volgorde in.
4.2 Instellingen van detectiefluorescentie: (1) Monkeypox-virus (FAM);(2) Interne controle (CY5).
4.3 Voer het volgende fietsprotocol uit
Protocol van ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Stappen | Temperatuur | Tijd | Cycli | |
| 1 | Pre-denaturatie | 95℃ | 2 minuten | 1 |
| 2 | Denaturatie | 95℃ | 10 sec | 45 |
| Uitgloeien, extensie, fluorescentie-acquisitie | 60℃ | 30 sec | ||
Protocol van BTK-8:
| Stappen | Temperatuur | Tijd | Cycli | |
| 1 | Pre-denaturatie | 95℃ | 2 minuten | 1 |
| 2 | Denaturatie | 95℃ | 5 sec | 45 |
| Uitgloeien, extensie, fluorescentie-acquisitie | 60℃ | 14 sec | ||
5. Resultatenanalyse (raadpleeg de gebruikershandleiding van het instrument）
Na de reactie worden de resultaten automatisch opgeslagen.Klik op “Analyseren” om te analyseren, en het instrument interpreteert automatisch de Ct-waarden van elk monster in de resultaatkolom.De negatieve en positieve controleresultaten moeten voldoen aan de volgende "6. Kwaliteitscontrole".
6. Kwaliteitscontrole
6.1 Negatieve controle: Geen Ct of Ct>40 in FAM-kanaal, Ct≤40 in CY5-kanaal met normale versterkingscurve.
6.2 Positieve controle: Ct≤35 in FAM-kanaal met normale amplificatiecurve, Ct≤40 in CY5-kanaal met normale amplificatiecurve.
6.3 Het resultaat is geldig als aan alle bovenstaande criteria is voldaan.Anders is het resultaat ongeldig.
Resultaatinterpretatie
De volgende resultaten zijn mogelijk:
| Ct-waarde van FAM-kanaal | Ct-waarde van CY5-kanaal | Interpretatie | |
| 1# | Geen Ct of Ct>40 | ≤40 | Monkeypox-virus negatief |
| 2# | ≤40 | Eventuele resultaten | Monkeypox-virus positief |
| 3# | 40~45 | ≤40 | Opnieuw testen;als het nog steeds 40~45 is, rapporteer dan als 1# |
| 4# | Geen Ct of Ct>40 | Geen Ct of Ct>40 | Ongeldig |
OPMERKING: Als er een ongeldig resultaat optreedt, moet het monster opnieuw worden verzameld en getest.
order informatie
| productnaam | Kat.Nee | Maat | Voorbeeld | Houdbaarheid | Trans.& St.Temp. |
| Monkeypox Virus Realtime PCR-kit | B001P-01 | 48 testen/kit | Serum/laesie-exsudaat | 12 maanden | -25~-15℃ |
